Автор статьи:
Ершов П.П.
Введение
Грибы рода Malassezia - это липофильные дрожжи, являющиеся представителем нормальной сапрофитной микобиоты кожного покрова теплокровных животных и человека. Они обитают на здоровой коже, потребляют жироподобные компоненты, выделяемые хозяином, при этом синтезируют вещества, ингибирующие жизнедеятельность бактерий и грибов. Однако при нарушении симбиоза между микро - и макроорганизмом, что обусловлено нарушением иммунологических защитных механизмов носителя (применение гормонотерапии, длительной антибиотикотерапии и т.п.), грибы рода Malassezia могут вызвать заболевание кожного покрова.
В настоящее время доказана наследственная предрасположенность и отсутствие передачи инфекта контактным путем (Faergemann J. 2001),а также не установлена зависимость частоты встречаемости от пола и возраста животного (Ross Bond 1997). Имеются данные свидетельствующие, что наличие гриба рода Malassezia при заболеваниях кожи способствует утяжелению процесса за счет аллергизирующего фактора (S. Johansson и K. Karlstrom 1993), в следствии способности индуцировать высокий уровень специфических IgE антител (Jensenjarolim E. 1992).
Оптимальным условием для жизнедеятельности липофильных грибов является повышенная влажность, температура и наличие секрета с высоким содержанием липидов, поэтому наиболее благоприятным местом для обитания грибов рода Malassezia является наружный слуховой проход.
Так как грибы рода Malassezia являются частью нормальной микобиоты слухового прохода собак, сам факт выделения гриба еще не свидетельствует о его этиологической роли в возникновении отитов.
Целью настоящего исследования явилось определение взаимосвязи концентрации колонеобразующих единиц (КОЕ) грибов рода Malassezia в ушной раковине с клиническим проявлением отита у собак.
Материалы и методы
Исследование выполнено на базе питомника служебных собак и лаборатории микозов ВГНКИ. Пробы были отобраны из наружной ушной раковины 25 собак из них, 14 были клинически здоровыми и 11 собак с проявлением различных форм отита. Предварительно был выполнен сбор анамнестических данных и полный клинический осмотр. У собак с отитом отбор образцов проводился только при отсутствии терапии не менее 5 дней. С целью исключения отита паразитарной этиологии выполнялось микроскопическое исследование материала. Выделение грибов выполнялось единым методом для всех животных путем забора материала на жидкую транспортную среду с последующим пересевом на модифицированные нами селективные питательные среды. Посевы культивировали при температуре 350С в течении 7 - 14 дней. Идентификацию грибов рода Malassezia проводили на основании морфологических и ферментативных свойств с последующим подсчетом (КОЕ) в пробе.
Данные о животных и результатах исследования представлены в таблице 1. Таблица 1
№ порода грибы рода malassezia в КОЕ
Собаки с хроническим отитом 1 бобтейл 1100 2 далматин 1300 3 ам.кокер спаниель 850 4 черный терьер 140 5 чау - чау 960 6 б/п 46 7 б/п 640 8 кавказская овчарка 380 Среднее КОЕ 677 Выделено 100 %
Собаки с острым отитом 9 далматин 30 10 ам. стафф - 11 среднеазиатская овчарка 5 12 такса 14 Среднее КОЕ 16.3
Клинически здоровые собаки 13 далматин 60 14 немецкая овчарка - 15 анг.кокер спаниель 40 16 немецкая овчарка 120 17 восточно-европейская овчарка - 18 немецкая овчарка 80 19 восточно-европейская овчарка - 20 немецкая овчарка - 21 немецкая овчарка 3 22 кавказская овчарка 20 23 восточно-европейская овчарка 880 24 кавказская овчарка - 25 кавказская овчарка 12 Среднее КОЕ 93 Выделено 61.5 % Из вышеприведенной таблицы следует, что из слухового прохода клинически здоровых собак грибы Malassezia pachydermatis были изолированы в 61,5% случаев, при этом содержание дрожжевых клеток в образце составляло в среднем 93 КОЕ. От животных с клиническими признаками острого отита грибы рода Malassezia выделялись в 75% случаев, а содержание дрожжевых клеток в пробе составляло в среднем 16 КОЕ. Наконец, от животных с хроническим отитом грибы рода Malassezia были изолированы в 100% случаев, при этом содержание клеток гриба в пробе составляло в среднем 667 КОЕ.
Как у здоровых животных, так и у животных с острым отитом, количество дрожжевых клеток в среднем не превышало 100 КОЕ в образце. Стоит отметить, что у здоровой собаки (№23) содержание дрожжевых клеток было патологически высоким (880 КОЕ). При последующем наблюдении за животным, спустя 7-10 дней, были зафиксированы клинические признаки отита. Этот клинический случай подтверждает взаимосвязь численности популяции дрожжей Malassezia в слуховом канале с клиническим проявлением отита. У 5 из 13 здоровых животных изолировать гриб из слухового прохода не удалось.
От одного из 4-х животных с острым отитом изолировать Malassezia также не удалось, а у трех остальных содержание клеток гриба в образце не превышало 30 КОЕ.
Что касается собак с клиникой хронического отита, то от всех 8-ми животных были изолированы дрожжи рода Malassezia, причем их содержание в образце составляло в среднем 677 КОЕ. Только у одной собаки (№6) оно было менее 100 (46 КОЕ), в остальных случаях содержание дрожжевых клеток колебалось от 140 до 1300 КОЕ в образце.
Полученные данные свидетельствуют об этиологической роли дрожжей рода Malassezia именно при хронических отитах, на что указывает как частота выделения гриба, так и высокая концентрация его клеток в очаге поражения. Можно предположить, что содержание 200 и более КОЕ гриба в образце наряду с клиникой отита может свидетельствовать о микогенной этиологии поражения. С другой стороны, как показывают приведенные даннные, при остром течении отита грибы рода Malassezia не играют этиологической роли.
При изучении чувствительности выделенных изолятов Malassezia pachydermatis к антифунгальным препаратам (нистатину, амфотерицину В, клотримазолу, флюконазолу, тербинафину) была установлена чувствительность этих дрожжей к нистатину и тербинафину.
Выводы:
На основании полученных результатов сделаны следующие выводы. Грибы рода Malassezia:
- являются компонентом микрофлоры наружной ушной раковины собак;
- не являются этиологическим фактором развития острых отитов;
- отмечена взаимосвязь между концентрацией КОЕ гриба рода Malassezia и появлением клинических признаков отита;
- определение концентрации КОЕ грибов рода Malassezia, является одним из диагностических показателей при отитах у собак.
Список литературы
1. Guillot J, Gueho E. The diversity of Malassezia yeasts confirmed by RNA sequence and nuclear DNA comparisons. Antonie van Leeuwenhoek 1995; 67:297-314.
2. Gueho E, Midgley G, Guillot J. The genus Malassezia with description of four new species. Antonie van Leeuwenhoek 1996,69:337-355.
3. Guillot J, Gueho E, Lesourd M et al. Identification of Malassezia species. A practical approach. J Mycol Med 1996; 6:103-110.
4. Guillot J,.1997.Epidemiological analysis of Malassezia pachydermatis isolates by partial sequencing of the large subunit ribosomal RNA. Res. Vet.Sci.62,22-25.
5. Guillot, J.& Bond, R. (1999) Malassezia pachydermatis; a review. Med.Mycol.37,295-306.
6. Faergemann J. Seborrhoeic dermatitis and Pityrosporum (Malassezia) folliculitis: characterization of inflammatory cells and mediators in the skin by immunohistochemistry. British Journal of Dermatology, 144 (2001), 3 (549-556).
7. Ross Bond BVMS Malassezia pachydermatis и заболевания кожи у собак. Waltham Focus vol 7 0 2, 1997 .